原位雜交技術(shù)的原理是什么?有何用途
原位雜交技術(shù)的原理是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列,將有性或非性的外源核酸(即探針)與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì),結(jié)合成專一的核酸雜交分子,經(jīng)一定的檢測(cè)手段將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來。為顯示特定的核酸序列要具備3個(gè)重要條件:組織、細(xì)胞或染色體的固定、具有能與特定片段互補(bǔ)的核苷酸序列(即探針)、有與探針結(jié)合的標(biāo)記物(曾呈奎等2000)。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏,可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便:FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便,雜交過程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過于復(fù)雜的設(shè)備,便于在實(shí)驗(yàn)室開展。